L-抗壞血酸(維生素C)測定試劑盒(酶學方法)
應用于食品,飲料及生物制品檢測
Cat. No.: E 0409 677 Pack Size: 20 tests
比色方法
此方法用于檢測水果和蔬菜(如馬鈴薯),水果和蔬菜產品(如西紅柿醬、泡菜、果醬、果汁),嬰兒食品,啤酒,飲料,流食,粉狀和烘烤劑,肉產品,奶制品,葡萄酒,還有動物飼料,醫藥品(如維生素配制、陣痛藥、退燒藥)和生物樣品中的L-抗壞血酸(維生素C),
分析物
L-抗壞血酸不定量的分布于動物和植物中。人類不能自身生產L-抗壞血酸,因此必須由外源(vitamin C)提供。***般情況下來源于水果和蔬菜中,出于技術原因,L-抗壞血酸曾被用于食品工業中的抗氧化劑。它是***種相對敏感的物質,L-抗壞血酸的檢測非常適用于從原始水果和蔬菜中加工食品的質量評定。
L-抗壞血酸用于醫藥品生產中的組成部分,如維生素產品和陣痛藥,另外,它還用于動物飼料添加劑中。
原理
L-抗壞血酸 (x-H2) + MTT+ PMS—> dehydroascorbate (x) + MTT-formazan + H+X
L-抗壞血酸 + ? O2 AAO——> dehydroascorbate + H2OX
特異性
在給定的條件下,此方法特別針對于L-抗壞血酸。合成的D-阿拉伯抗壞血酸/阿拉伯糖型抗壞血酸能作為抗氧化劑,也能反應,但反應速度較慢。
靈敏度和反應下限
測定靈敏度為0.005個吸光度單位,樣品體積為1.600ml,此相當于0.1mg/l樣品溶液中的L-抗壞血酸濃度。0.015個吸光度單位的差異能造成0.3 mg/l檢測限,樣品體積為1.600 ml.。
線性
測定的線性范圍為0.5 ugL-抗壞血酸(0.3mgL-抗壞血酸/l樣品溶液體積為1.600ml)到20 ugL-抗壞血酸(0.2gL-抗壞血酸/l樣品溶液體積為0.100ml)
精密度
在用***個樣品做重復實驗時,可能會產生0.005-0.010個吸光度單位的差異。標準的相對偏差(變異系數)大約為1-3%。當分析檢測數據時,要考慮到L-抗壞血酸的水溶液穩定性較差,尤其是重金屬離子或氧存在時。
干擾及錯誤來源
糧食的成分不經常干擾實驗。高濃度的酒精和D-山梨酸醇能降低反應速度,大量的亞硫酸鹽必須通過添加甲醛來去除。醋酸抑制酶AAO。金屬和 亞硫酸鹽離子可以導致L-抗壞血酸的自發分解。
試劑盒包括內容
1.磷酸鹽/檸檬酸緩沖液 ———— pH值大約3.5;MTT
2.AAO(坑壞血酸-氧化酶)—— 每板約17 U AAO
3. PMS 溶液
試劑
用于檢測L-抗壞血酸的試劑從the Hazardous Substances Regulations, the Chemicals Law or EEC Regulation 67/548/EEC and subsequent alteration,supplementation and adaptation guidelines的意義上說是無害的。無論如何,所有應用的化學試劑的***般安全性應該堅持下去。用完后,試劑能隨實驗室的廢物處理掉,但有些地方條例有待完善。
樣品制備的***般方法
使用方法:直接用清亮、無色、中性液體樣品,或稀釋后體積達1.600ml;
過濾混濁液;
除去樣品中的二氧化碳(如通過濾青裝置)
用聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)處理“重顏色"樣品和更大體積的樣品。
破碎或攪勻的固體或半固體樣品,用偏磷酸萃取或溶解。
用15%w/v的偏磷酸除去樣品中的蛋白質。
含有脂肪的樣品用偏磷酸萃取。