幾種常見的PCR儀的區(qū)別及保養(yǎng)
PCR儀作為分子生物學相關實驗的常規(guī)儀器,每年都有數(shù)千臺的選購量,但是如何選擇PCR儀,相信大***在選擇時還有***些困惑。PCR儀作為***種精密儀器,平時應該怎么保養(yǎng)?下面給大***講解***下
常見幾種PCR儀分類
普通PCR儀
***般把***次PCR擴增只能運行***個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。
主要應用于科研、教學、臨床醫(yī)學、檢驗、檢疫等。
梯度PCR儀
***次性PCR擴增可以設置***系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因為被擴增的不同的DNApian段其***適合的退火溫度不同,通過設置***系列的梯度退火溫度進行擴增,從而***次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的***適合退火溫度進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約經(jīng)費。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。正真的梯度,是每***排管都有精確的加熱控溫探頭,其他的都是從兩頭的熱傳遞來設計控溫。
梯度PCR儀多應用于科研、教學機構。
熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設計基礎上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結果輸出。
熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當只用***種熒光探針標記的時候,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產物,因為***次只能檢測***種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)***次檢測多種目的基因的功能。
實時熒光定量PCR儀主要應用于臨床醫(yī)學檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。
在PCR儀的維護保養(yǎng)中,需要注意以下問題:
1.PCR儀器需要定期檢測,視制冷方式而定***般半年至少***次。
2.PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不***致的,當檢測發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1——2℃時,可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。
3.PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當PCR儀的降溫過程超過60s,就應該檢查儀器的制冷系統(tǒng),對風冷制冷的PCR儀要較徹底地清理反應底座的灰塵;對其他制冷系統(tǒng)應檢查相關的制冷部件。
4.***般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調整儀器的電子控制部件,必要時要請專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。