毛細管電色譜儀的優(yōu)點及核心部件
電色譜是化學學科的分析化學專業(yè)的色譜分析類中的***種新興分析技術(shù)。全稱為毛細管電色譜,簡稱CEC。
毛細管電色譜儀整合了液相色譜(HPLC)和毛細管電泳(CE)的優(yōu)點,在毛細管柱中填充固定相顆粒、管壁鍵合或涂覆固定相、制成連續(xù)床固定相,以壓力和電滲流共同驅(qū)動流動相,利用樣品各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)差異和本身淌度差異進行分離。在液相色譜和毛細管電泳雙重分離機理的作用下,毛細管電色譜對樣品細微之處的分辨能力得到極大提高,既能分離帶電組分,又能分析中性分子,對復(fù)雜的混合樣品顯示出強大的分離潛力,代表微分離分析的趨勢。
毛細管電色譜采用液相色譜固定相,通過高壓輸液泵產(chǎn)生的液壓和在毛細管柱兩端加上高壓直流電場所產(chǎn)生的電場力,即依靠液壓和電滲流共同驅(qū)動流動相,使樣品組分根據(jù)它們的色譜行為和電泳速度的不同而達到分離。
其中,毛細管電色譜儀的核心部件是電色譜柱,按固定相形式不同可分為填充毛細管柱、開管毛細管柱和整體毛細管柱。
填充毛細管柱是將固定相填充到毛細管中,通過兩端燒結(jié)柱塞將固定相保持在毛細管中而成。其***大優(yōu)點是可利用眾多的HPLC固定相,根據(jù)化合物與固定相的作用不同實現(xiàn)分離,在CEC中應(yīng)用非常廣泛。填充毛細管柱具有柱效高、固定相資源豐富的特點,但也存在柱塞制備和柱填充,步驟繁瑣,重現(xiàn)性差的缺點。
開管毛細管柱是將固定相鍵合或涂敷在毛細管壁上,引入色譜分配機理。與填充毛細管柱相比,由于沒有渦流擴散,分離效率更高,分離時間大大縮短;由于不用柱塞,制備簡單,減小了氣泡產(chǎn)生的可能性。但開管毛細管柱的柱容量小,對溶質(zhì)的保留有限。
整體毛細管柱是采用有機和無機方法在毛細管中進行原位自由基聚合反應(yīng)或固化,形成連續(xù)床固定相。整體毛細管柱***般采用柱內(nèi)直接鍵合的方法形成整塊多孔的交聯(lián)聚合物,不用柱塞,簡化了柱制備過程。通過改變單體可引入多種官能團,有更好的多孔性和滲透性,對流動相阻力小,溶質(zhì)在固定相和流動相之間快速分配,有利于實現(xiàn)高速分離??蓪ι锎蠓肿舆M行快速分離。按基質(zhì)不同可分為無機基質(zhì)整體毛細管柱、有機基質(zhì)整體毛細管柱、顆粒固定化整體毛細管柱和雜化材料整體毛細管柱。
與液相色譜相比,毛細管電色譜的分析時間更短、柱內(nèi)徑更細、分離速度更快,使溶劑消耗量更少,由此產(chǎn)生的廢液更少,大大降低了成本,保護環(huán)境。目前,毛細管電色譜為蛋白質(zhì)組學、生物醫(yī)藥學、中草藥分析、環(huán)境保護、食品安全和手性化合物分析等領(lǐng)域提供了創(chuàng)新的技術(shù)手段。填充毛細管電色譜更是在蛋白質(zhì)分析中有著很大的潛力。